Chat ngay
+84 2438612612
CÔNG TY TNHH THIẾT BỊ KHOA HỌC KỸ THUẬT AN DƯƠNG
info@adgroup.vn

Đánh giá phản ứng của cá Vược Đông Nam Á (Lates calcarifer) với việc tiêm chủng phòng bệnh Streptococcus iniae bằng cách sử dụng phương pháp ELISA.

Thứ hai, 18/03/2024

Tiêm chủng là một công cụ quan trọng để bảo vệ động vật nuôi khỏi các bệnh truyền nhiễm. Mặc dù việc tiêm

chủng rất phổ biến trong động vật chăn nuôi và gia súc,nhưng tiêm chủng cho cá nuôi vẫn còn hạn chế hơn (1).

Một nghiên cứu gần đây từ Tinh và đồng nghiệp tại Viện Công nghệ Asian tại Thái Lan đã nghiên cứu khả năng

của cá Vược (Lates calcarifer, Bloch 1790) để phản ứng miễn dịch với một loại vaccine chống lại vi khuẩn gây

bệnh phổ biến Streptococcus iniae (2). Các phương pháp ELISA được thực hiện bằng máy đọc đĩa hấp thụ

Ao Absorbance Microplate Reader (Số catalog # AC3000) từ Azure Biosystems đã là một phần không thể thiếu

của nghiên cứu này.

Lates calcarifer và phản ứng của nó đối với vi khuẩn Streptococcus iniae 

Cá Vược Đông Nam Á là một loài có ý nghĩa thương mại đáng kể trong ngành nuôi trồng thủy sản ở các

vùng nước ven biển của Đông Nam Á. Giống như các loài cá khác, loài cá nuôi này dễ bị bùng phát bệnh

do nhiễm trùng vi khuẩn và virus. Một tác nhân gây bệnh quan trọng đối với cá nuôi ở Đông Nam Á là vi khuẩn

Streptococcus iniae. S. iniae có thể lây nhiễm cho các loài cá khác và động vật có vú như con người và cá heo,

gây tỷ lệ tử vong đáng kể, tổn thương da và bệnh nhiễm trùng hệ thống. Để bảo vệ cá (và sau đó là những

người nuôi cá) khỏi S. iniae, việc tiêm chủng là cần thiết. Lý tưởng là việc tiêm chủng nên diễn ra sớm trong vòng

đời của cá, trước khi tiếp xúc với tác nhân gây bệnh. Tuy nhiên, vẫn còn rất nhiều điều chưa biết về thời điểm

phát triển của hệ miễn dịch thích ứng ở cá Vược con và liệu cá con có thể phản ứng với tiêm chủng hay không.

Nghiên cứu đáp ứng miễn dịch với S. iniae

Trong một nghiên cứu gần đây, Vinh và đồng nghiệp đã nghiên cứu khả năng của cá Vược đang trưởng thành

ở giai đoạn cá con để phản ứng miễn dịch với một loại vắc xin chống lại S. iniae. Cá được tiêm vắc xin vào 35

hoặc 42 ngày sau khi nở (dph) bằng cách sử dụng vắc xin S. iniae được bất hoạt bằng nhiệt thông qua phương

pháp tiêm chủng ngâm (vắc xin được thêm vào nước mà cá được nuôi). Phản ứng miễn dịch của cá đã được

đánh giá bằng cách đo lường sự sản sinh kháng thể của IgM bằng ELISA và đo lường mức biểu hiện của một

số gene liên quan đến miễn dịch.

Các thí nghiệm ELISA đã đánh giá lượng kháng thể mà cá sản xuất để nhắm mục tiêu vào một kháng nguyên

của S. iniae.Các đĩa Elisa chứa kháng nguyên đã được phủ và sau đó được ủ bằng kháng thể được chuẩn bị từ cá

đã được tiêm vắc xin vào các thời điểm được xác định sau tiêm chủng. Sáu con cá đã được đánh giá vào thời

điểm 0, 7 và 14 ngày sau tiêm chủng. Kháng thể của cá bám vào đĩa Elisa và được phát hiện bằng cách sử dụng

kháng thể bậc 1 anti-Asian seabass và kháng thể bậc 2 goat-anti- mouse secondary antibody conjugated to HRP.

Lượng kháng thể bậc 2 bám vào đã được xác định bằng cách đo hấp thụ của cơ chất phát quang (3,3′,5,5′-

tetramethylbenzidine (TMB)) tại bước sóng 450nm trên máy đọc đĩa Ao Absorbance Microplate Reader.

Azure Biosystems Ao Absorbance Microplate Plate Reader is used for ELISA, Bradford Assays, and more
Với máy đọc đĩa Ao Microplate, độ chính xác và tốc độ đọc ưu việt. Với tốc độ đọc <6 giây, và độ chính xác < 0.005 ± 1% (0-3) OD, bạn sẽ đọc được kết quả nhanh chóng và chính xác

Các kết quả của nghiên cứu

Các thí nghiệm ELISA đã chứng minh rằng tiêm chủng đã dẫn đến một sự tăng đáng kể trong việc sản xuất các

kháng thể nhắm mục tiêu đến S. iniae ở cá Vược con. Trong số cá có tuổi là 35 ngày sau khi tiêm, bốn trong số

sáu con cá đã tạo ra các kháng thể đối với kháng nguyên S. iniae 14 ngày sau khi tiêm chủng. Trong số cá có tuổi

là 42 ngày sau khi tiêm, hai trong số sáu con cá đã có kháng thể đối với kháng nguyên S. iniae sau bảy ngày tiêm,

và ba trong số sáu con cá đã có kháng thể sau 14 ngày tiêm chủng.

Các thí nghiệm biểu hiện gen tương tự đã chứng minh rằng sự biểu hiện của các gen liên quan đã tăng lên ở cá con.

Sự thay đổi biểu hiện đã được phát hiện một ngày sau khi tiêm chủng ở cá có tuổi là 42 ngày so với bảy ngày ở cá có

tuổi là 35 ngày. Không có các phép đo được thực hiện giữa một và bảy ngày, vì vậy bất kỳ thay đổi biểu hiện nào trong

khoảng thời gian đó cũng không thể được xác định.

Các tác giả kết luận rằng việc tiêm chủng sớm cho cá Vược là khả thi và cá Vược có tuổi là 35 ngày có thể phát triển

miễn dịch chống lại một vi sinh vật gây bệnh. Phương pháp tiêm chủng ngâm đã thành công với cá con, cho thấy

phương pháp này là thực tế hơn khi sử dụng với cá con.

Sử dụng trong nghiên cứu này: Máy đọc vi đĩa Ao Absorbance Microplate Reader từ Azure Biosystems

Máy đọc vi đĩa Ao Absorbance Microplate Reader được các nhà nghiên cứu tại Viện Công nghệ Á-Âu bao gồm một bánh

lọc 8 vị trí để linh hoạt đo hấp thụ của nhiều thí nghiệm thông thường, bao gồm cả thử nghiệm TMB (như trong công việc

gần đây được thảo luận ở đây), thử nghiệm Lowry, thử nghiệm Bradford, và nhiều hơn nữa. Máy đọc này bao gồm một

bộ rung tích hợp với tốc độ lựa chọn, chế độ đọc đơn và đôi, và phần mềm phân tích để làm cho việc thực hiện và giải

thích các thí nghiệm ELISA và các thí nghiệm dựa trên các đĩa 96 giếng nhanh chóng và dễ dàng. Tìm hiểu thêm về máy

đọc vi đĩa hấp thụ Ao bằng cách nhấp vào đây.

Tài liệu tham khảo
  1. Cain K. Vaccines may be the biggest tool in the fish health toolbox. Aquaculture North Ameriican website. Published March 22, 2021. Accessed January 19, 2024. https://www.aquaculturenorthamerica.com/vaccines-may-be-the-biggest-tool-in-the-fish-health-toolbox/
  2. Vinh NT, Dong HT, Lan NGT, et al. Immunological response of 35 and 42 days old Asian seabass (Lates calcarifer, Bloch 1790) fry following immersion immunization with Streptococcus iniae heat-killed vaccineFish Shellfish Immunol. 2023;138:108802.